夜间班机因旅客大都熬夜熬得双眼通红，故得名为红眼班机。勒克斯大西洋酒店的高级行政人员丽莎（瑞秋•麦克亚当斯 饰）今天不得不搭乘她最不喜欢的红眼班机，因为她参加完祖母的丧礼后，次日就要上班。丽莎的运气还不错，在机场遇到了英俊潇洒的杰克逊（希里安•墨菲 饰），两人相谈甚欢。更让丽莎惊喜的是，两人搭乘的是同一趟红眼班机，而且还相邻而坐。丽莎万万没有想到，原本温文尔雅的杰克逊露出了他的狰狞面目。

想想是一个三十出头的空姐，在班机上与同事闲谈感情生活，想想的两个男友令她无法抉择：一个是成熟稳重的有妇之夫，一个是年轻稚嫩的录音师。在同一班机上，四十出头的Lili与丈夫、女儿一起出游回国。二十多岁的小洁也在飞机上，她想到台湾实现当歌手的梦想。虽然想想一直周旋在两个男人之间，可她对前男友念念不忘；开花店的Lily在偶然之下得知了一个秘密，决定与丈夫离婚；小洁则需要面对渺茫的前途。